Определение остатков антибиотиков амфеникола в курином мясе с помощью Wayeal LCMS-TQ9200

Ключевые слова:LCMS, амфеникол, безопасность пищевых продуктов, остатки ветеринарных препаратов.

1Инструмент и реагенты

1.1 Список конфигураций LCMS

Таблица 1 Список конфигураций приборов

1.3 Экспериментальные материалы и вспомогательное оборудование

Ультразвуковое очищающее средство

Миксер вихрей

Водяная ванна излучатель азота

Высокоскоростные центрифуги

2. Методы эксперимента

2.1 Приготовление раствора

2.1.1 2% аммиачный этиловый ацетат раствор: взять 4 мл воды аммиака и развести его до 200 мл с этиловым ацетатом.

2.1.2 4% раствор хлорида натрия: взять 4 г хлорида натрия, растворить его в воде и развести до 100 мл.

2.1.3 4% насыщенный хлоридом натрия раствор n-гексана: возьмите подходящее количество 4% раствора хлорида натрия, добавьте избыток n-гексана, смешайте, оставьте стоять для отделения слоя,и взять верхний слой n-гексана.

2.1.4 Смешанный внутренний стандартный рабочий раствор: принимается соответствующее количество смешанного внутреннего стандартного раствора;разбавлять 20% метанолом, чтобы получить хлорамфениколь-D5 при 10 нг/мл и другие внутренние стандарты (флорфениколь-D3, тиамфениколь- D3 и флорфениколь- амино- D3) в 50 нг/ мл каждый.

2.2 Предварительная обработка проб

2.2.1 Экстракция образца: взвешивают 2 г образца (с точностью до ±0,01 г), добавляют 100 мкл смешанного внутреннего стандартного рабочего раствора, вихрь в течение 1 мин, добавляют 10 мл 2% аммиачного этилоацетата раствора,вихрь в течение 10 мин., центрифугируйте при 8000 оборотах в минуту в течение 5 минут и собирайте надлежащий материал. Добавьте к остатку еще 10 мл 2%-ного раствора амониевого этилоацетата и повторите процедуру экстракции.Объедините два супернатанта, испаряется до сухости под потоком азота при температуре 50°C и хранится для использования.

2.2.2 Очистка образца: добавить 3 мл 4% раствора хлорида натрия к остатку очистки, вихрь растворить, затем добавить 5 мл 4% натрия хлорида насыщенного раствора n-гексана, вихрь на 30 секунд,центрифуга при 8000 оборотах в минуту в течение 5 минут, и удалить верхний слой n-гексана. повторить процедуру обезжиривания один раз. добавить 5 мл 2% аммиачного этилового ацетата раствор, вихрь в течение 10 минут, центрифугировать при 8000 оборотов в минуту в течение 5 минут,и собрать сверхнаводнителяДобавить к остатку еще 5 мл 2% аммиачного этилового ацетата раствора и повторить процедуру экстракции.добавить 1 мл 20% метанольного раствора, вихрь на 30 секунд, фильтруйте через мембрану, и ждите инструментального анализа.

2.3 Условия эксперимента

2.3.1 Условия жидкой хроматографии

Колонка хроматографии: C18 1,7μm 2,1x50mm

Мобильная фаза: A: ацетонитрил; B: 2 мМ амониевого формата в воде

Скорость потока: 0,3 мл/мин

Температура колонны: 40 °C

Объем инъекции: 5μl

2.3.2 Условия масс-спектрометрии

Таблица 3 Параметры ионного источника

3Результат эксперимента.

3.1 Стандартная хроматограмма

Определение четырех амидных антибиотиков и их внутренних стандартов было завершено в течение 6 минут.и каждое соединение показало удовлетворительную реакцию, отвечающие экспериментальным требованиям.

Рисунок 1 Хроматограмма 4 амфеникольных антибиотиков и внутренний стандарт (хлорамфениколь 0,2 нг/мл, другие антибиотики 1 нг/мл)

3.2 Линейный диапазон

Принимается соответствующее количество стандартного раствора, смешанного с амид-алкоголем, и постепенно разбавляется до ряда концентраций для получения стандартной кривой.Для количественного анализа использовался стандартный метод изотоповЛинейный диапазон составлял 0,2 - 10 нг/ мл для хлорамфеникола и 1- 50 нг/ мл для флорфеникола амина, тиамфеникола и флорфеникола.Отклонение между результатами линейного обнаружения и известными концентрациями было меньше максимально допустимого отклонения, с значениями R2 в диапазоне от 0,9958 до 0.9998, что указывает на отличную линейность для всех компонентов.

Таблица 4 Линейный диапазон соединений

Рисунок 2 Данные калибровочной кривой четырех соединений

3.3 LOD и LOQ

В китайском национальном стандарте безопасности пищевых продуктов GB 31658.20-2022 указано, что для этого метода предел обнаружения (LOD) хлорамфеникола составляет 0,1 мкг/кг, а предел количественного определения (LOQ) - 0.2μg/kg; в то время как для тиамфеникола, флорфеникола и флорфеникола-амина LOD составляет 0,5 мкг/кг и LOQ - 1 мкг/кг.Соотношение сигнал-шум для всех целевых соединений при указанных концентрациях пределов обнаружения (LOD) и количественного определения (LOQ) значительно больше 3 и 10, который соответствует требованиям чувствительности, указанным в национальном стандарте.

Таблица 5 Границы обнаружения и количественного определения для каждого соединения

Рисунок 3 Хроматограммы пределов обнаружения и пределов количественного определения для четырех соединений

3.4 Испытания точности

Принимают низкие, средние и высокие концентрации амфеникола стандартных растворов смеси, и выполнять шесть последовательных инъекций, чтобы сравнить отклонения в времени удержания и пиковой области.Результаты приведены в таблице нижеОтклонения времени удержания всех соединений амфеникола были менее 1%, а отклонения пиковой области были менее 5%,отвечает требованиям точности RSD ≤ 15% согласно национальному стандарту.

Таблица 6 Испытание точности для каждого соединения

Рисунок 4 Точные хроматограммы четырех амидовых спиртосоединений

3.5 Испытание восстановления матричной нагрузки

Точность этого метода обнаружения оценивалась с помощью испытания восстановления пика. Добавляя известные концентрации стандартных образцов к пробе в пустой матрице в различных соотношениях для предварительной обработки,Приготовление матричных образцов при высокойКаждый уровень концентрации в добавленных образцах был независимым образом проанализирован шесть раз.Уровень восстановления был рассчитан путем сравнения обнаруженной концентрации в матрице до и после добавления.Результаты показаны следующим образом: в матрице курицы показатели восстановления всех соединений колебались от 94,5% до 107,2%, при CV в пределах 5%,с указанием того, что точность соответствует требованиям метода.

Таблица 6 Показатели восстановления соединений в матрице куриной пики

3.6 Испытание образца

Пробы куриной груди, купленные в супермаркетах, были извлечены и очищены с использованием вышеупомянутого метода предварительной обработки проб.ни один из четырех амидовых антибиотиков не был обнаружен.

Рисунок 5 Хроматограмма четырех амидных спиртосоединений в образцах куриной груди в супермаркете

4Заключение.

Этот метод использует систему масс-спектрометрии жидкой хроматографии Wayeal LCMS-TQ9200 для определения амфеникольных антибиотиков в продуктах животного происхождения.позволяющий одновременное приобретение соединений как в положительном, так и в отрицательном ионном режимахДанные свидетельствуют о том, что метод дает хорошо сформированные хроматографические пики без хвоста, а его чувствительность соответствует требованиям национальных стандартов.Линейные коэффициенты корреляции все больше 0..99Отклонение времени удержания для всех соединений в течение шести последовательных инъекций составляет менее 1%, а отклонение пиковой области составляет менее 5%, демонстрируя хорошую точность.Уровень восстановления в куриной матрице колеблется от 94Анализировались случайные образцы куриной груди, приобретенные в супермаркетах.и ни один из четырех амфеникольных антибиотиков не был обнаруженЭто показывает, что метод, оснащенный системой жидкой хроматографии-массовой спектрометрии Wayeal,отвечает требованиям для рутинного качественного и количественного обнаружения целевых образцов.