Определение примеси нитрозамина в таблетках с гидрохлоридом пропранолола с помощью жидкой хроматографии

Ключевые слова: пропранолол, высокопроизводительная жидкая хроматография, примеси нитрозамина

1Инструменты и реагенты

1.1 Список конфигураций системы HPLC

1.2 Реагенты и стандартные растворы

Таблица 2 Реагенты и стандартные растворы

1.3 Экспериментальные материалы и вспомогательное оборудование

Ультразвуковое очищающее средство

Смеситель вихрей

2Метод эксперимента

2.1 Приготовление раствора

2.1.1 2моль/л раствор гидроксида натрия: возьмите 4 г гидроксида натрия, растворите в 50 мл воды и хорошо перемешайте.

2.1.2 Ацетонитриловодосерная кислота (55:45:0.1) Смесь: возьмите 1,6 г dodecyl sulfate натрия и 0,31 г tetrabutylammonium dihydrogen phosphate, добавьте 1 мл серной кислоты, 450 мл воды и 550 мл ацетонитрила.3 с раствором гидроксида натрия 2 моль/л, и хорошо смешивать.

2.1.3 Растворитель: то же самое, что и мобильная фаза.

2.1.4 Линейный раствор: точно взвесить соответствующее количество N-нитрозо-пропранолола в соответствии с эталонным стандартом;растворяют и разбавляют мобильной фазой, чтобы получить раствор, содержащий примерно 200 ng на 1 мл в качестве стандартного исходного раствораЗатем точно переносите соответствующие объемы исходного раствора в шесть 100 мл объемных колб, разбавленных до отметки с подвижной фазой.и хорошо перемешать, чтобы подготовить стандартную серию рабочих кривых с концентрациями 00,8 ng/mL, 1 ng/mL, 2 ng/mL, 3 ng/mL, 4 ng/mL и 6 ng/mL.

2.1.5 Референтный стандартный раствор: точно взвесить соответствующее количество N-нитрозопропранолола в качестве референтного стандарта,растворяют и разбавляют мобильной фазой для приготовления раствора, содержащего примерно 2 ng N-Нитрозопропранолола на 1 мл в качестве стандартного раствора отсчета.

2.2 Подготовка образцов

2.2.1 Образец раствора: точно взвесить соответствующее количество мелкопорошенных таблеток гидрохлорида пропранолола, растворить и разбавить мобильной фазой, чтобы приготовить раствор, содержащий приблизительно 0.27 мг пропранолола на 1 мл в качестве образцового раствора.

2.2.2 Точность Раствор: точно взвесить приблизительно 297 мг мелкопорошенных таблеток пропранолол гидрохлорида в 100 мл объемную колбу.Добавить соответствующее количество стандартного раствора N-нитрозопропранолола, растворяют и разбавляют до маркировки с помощью подвижной фазы для приготовления 100-процентной пробы. Хорошо перемешать, чтобы получить точное раствор.

3Результат эксперимента.

3.1 Специфика

Рисунок 2 Хроматограмма специфичности

Примечание: растворитель не влияет на обнаружение N-нитрозопропранолола,и хроматографические пики других примеси в испытуемом растворе также не влияют на определение примеси N-Нитрозо-пропранолола..

3.2 Линейное испытание

Рисунок 3 Стандартная кривая примеси N-нитрозо-пропранолола

Примечание: Результаты эксперимента показывают, что коэффициент корреляции (R) кривой испытания примеси N-Нитрозо-пропранолола превышает 0.999, соответствующие требованиям испытания.

3.3 Испытание повторности

Рисунок 4 Хроматограммы шести повторных инъекций для стандарта 2 нг/мл

Таблица 3 Данные шести повторных инъекций для стандарта 2 нг/мл

Примечание: как показано в таблице выше, повторяемость Н- нитрозо- пропранолола в течение времени удержания составляет 0,043%, а повторяемость пиковой области составляет 0, 464%, что указывает на хорошую повторяемость.

3.4 Испытание точности

Рисунок 5 Наложенные хроматограммы точности Н-нитрозопропранолола в таблетках

Таблица 4 Точность применения гидрохлорида пропранолола (N- нитрозопропранолол) в таблетках

Примечание: восстановление Н-нитрозопропранолола в шести образцах колебалось от 96,98% до 104,71%, при среднем восстановлении 101,38%.

3.5 Испытание LOD

Рисунок 6 Испытательная хроматограмма N-нитрозопропанолола при стандартной концентрации 2 нг/мл

В таблице 5 приведены данные референтных испытаний N-нитрозопропанолола при стандартной концентрации 2 нг/мл.

Примечание: Исходя из данных испытаний на N-нитрозо-пропранолол в концентрации 2 нг/мл в таблице выше,теоретический предел обнаружения Н-нитрозопропранолола рассчитывается как 0.151ng/mL с использованием соотношения сигнал-шум 3:1 в качестве предельного критерия обнаружения.

3.6 Испытание таблетки марки

Рисунок 7 Испытательная хроматограмма таблеток марки

Примечание: N- нитрозопропранолол не был обнаружен в таблетках марки.

4Заключение.

A study on the nitrosamine impurity N-nitroso-propranolol in propranolol hydrochloride tablets was conducted in accordance with the FDA's recently published guidance document on establishing acceptable intake levels for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRI)В соответствии с данным документом, значение АИ (приемлемого потребления) рассчитывается как 1500 ng/ день..Проверка метода была проведена с использованием высокопроизводительной серии жидкой хроматографии (HPLC) Wayeal®, оснащенной УФ-детектором.Образцы таблеток были проанализированы с использованием проверенного метода обнаружения.Все вышеприведенные данные соответствуют требованиям фармакопеи для приборов.