Определение уридин-5'-монофосфата в пищевых нутриентных фортификаторах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Как нуклеотид, уридин-5'-монофосфат (УМФ) является ключевым промежуточным продуктом в метаболизме нуклеиновых кислот в живых организмах. Это наиболее распространенный нуклеотид в молоке млекопитающих, и потребность в уридилате в рационе значительно выше, чем в других нуклеотидах, во время роста и развития потомства. В последние годы исследования показали, что УМФ не только участвует в энергетическом обмене и синтезе РНК, но также улучшает функцию кишечного барьера, модулируя клеточные сигнальные пути. Кроме того, он действует синергически с жирорастворимыми витаминами, способствуя усвоению питательных веществ и иммунной функции. УМФ обычно добавляют в качестве пищевого обогатителя в детские смеси и корма для скота/птицы, где его чистота и концентрация напрямую влияют на пищевую ценность и безопасность конечного продукта.

Ключевые слова: Пищевой нутриентный обогатитель, УМФ, Нуклеотиды, Высокоэффективная жидкостная хроматография.

1. Приборы и реагенты

1.1 Список конфигурации ВЭЖХ

Таблица 1 Список конфигурации ВЭЖХ

1.2 Реагенты и стандарты

Таблица 2 Список реагентов и стандартов

1.3 Экспериментальный материал и вспомогательное оборудование

Ультразвуковой очиститель

Вихревой смеситель

2. Метод и условия эксперимента

Хроматографическая колонка: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250 мм.

3. Результаты эксперимента

3.1 Тест пригодности системы

Тест пригодности системы показал, что целевой пик имел хорошую форму, с высоким числом теоретических тарелок и отсутствием мешающих пиков в его окрестностях, что соответствовало всем экспериментальным требованиям.

Рис. 1 Хроматограмма стандартного рабочего раствора уридин-5'-монофосфата

Таблица 3 Результаты испытаний стандартного рабочего раствора уридин-5'-монофосфата

3.2 Тестирование повторяемости

Стандартный рабочий раствор уридин-5'-монофосфата (УМФ) был введен шесть раз. Относительное стандартное отклонение (RSD) времени удерживания составило 0.085%, а площади пика - 0.191%. Оба значения были ниже указанного предела в 2.0%, что демонстрирует соответствие экспериментальным требованиям.

Рис. 2 Хроматограммы теста повторяемости уридин-5'-монофосфата (УМФ)

Таблица 4 Результаты тестирования повторяемости уридин-5'-монофосфата (УМФ)

3.3 Испытание образца

Площадь пика стандартного рабочего раствора 5'-уридинмонофосфата (20 мг/л) составила 322.525, а раствора испытуемого образца - 274.211. На основе метода внешнего стандарта было определено, что содержание УМФ в образце составляет 17 мг/л.

Рис. 3 Хроматограмма испытуемого образца

Таблица 5 Результаты испытания образца

3.4 Тест пригодности системы для родственных веществ

Тест раствора пригодности системы для родственных веществ показал, что все пики соединений имели хорошую форму, с высоким числом теоретических тарелок и разрешением более 2.0, что соответствовало экспериментальным требованиям.

Рис. 4 Хроматограмма стандартного рабочего раствора 5'-уридинмонофосфата (УМФ)

Таблица 6 Результаты испытаний стандартного рабочего раствора 5'-уридинмонофосфата (УМФ)

3.5 Тест воспроизводимости образца

После шести последовательных введений раствора пригодности системы повторяемость времени удерживания для 5'-УМФ, урацила и уридина составила 0.031%, 0.058% и 0.102% соответственно, в то время как повторяемость площади пика составила 0.243%, 0.134% и 0.134% соответственно, что соответствует экспериментальным требованиям.

Рис. 5 Хроматограмма теста воспроизводимости образца

Таблица 7 Результаты тестирования повторяемости времени удерживания родственных веществ

Таблица 8 Результаты тестирования повторяемости площади пика родственных веществ

3.6 Тест чувствительности для родственных веществ

Отношение сигнал/шум основного пика 5'-УМФ в растворе для тестирования чувствительности для родственных веществ значительно больше 3, что соответствует экспериментальным требованиям.

Рис. 6 Хроматограмма раствора для тестирования чувствительности родственных веществ

Таблица 9 Результаты тестирования раствора чувствительности родственных веществ

3.7 Тестирование растворов сравнения и образцов родственных веществ

Площадь пика раствора сравнения (17 мг/л) составила 275.856. Общая площадь пиков примесей в испытуемом растворе, за исключением 5'-уридинмонофосфата, составила 38.021. Расчет методом внешнего стандарта, содержание примесей в образце составляет 2.343 мг/л.

Рис. 7 Хроматограмма теста раствора сравнения родственных веществ

Таблица 10 Результаты тестирования раствора сравнения родственных веществ

Рис. 8 Хроматограмма теста раствора образца родственных веществ

Таблица 11 Результаты тестирования раствора образца родственных веществ

4. Заключение

В этом эксперименте, со ссылкой на "GB 1903.69-2024 Национальный стандарт безопасности пищевых продуктов: Пищевой усилитель 5'-уридинмонофосфат", анализ был проведен с использованием системы высокоэффективной жидкостной хроматографии Wayeal LC3200, оснащенной ультрафиолетовым детектором. Результаты эксперимента показывают, что тест пригодности системы продемонстрировал хорошую форму пиков для всех соединений, высокое число теоретических тарелок и разрешение выше 2.0, что соответствует экспериментальным требованиям. Повторяемость времени удерживания для стандартного рабочего раствора 5'-уридинмонофосфата и родственных веществ была ниже 0.2%, а повторяемость площади пика - ниже 0.3%, что указывает на хорошую воспроизводимость. Раствор для тестирования чувствительности для родственных веществ показал отношение сигнал/шум для основного пика 5'-уридинмонофосфата значительно больше 3, что соответствует экспериментальным требованиям. Все результаты испытаний образцов были нормальными. Вышеуказанные данные соответствуют требованиям к приборам, указанным в стандартном методе.